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超氧陰離子測(cè)試盒微量法

簡(jiǎn)要描述:本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱規(guī)格檢測(cè)方法貨號(hào)
超氧陰離子測(cè)試盒微量法100管/96樣微量法BK-01S6431
商品介紹:
測(cè)定意義:
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用,但積累過多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用,導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。
測(cè)定原理:
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-29
  • 訪  問  量:1001

詳細(xì)介紹

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

超氧陰離子測(cè)試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6431

商品介紹:

測(cè)定意義:

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用,但積累過多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用,導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。

測(cè)定原理:

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-在對(duì)氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,根據(jù)A530值可以計(jì)算樣品中O2-含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。11.png

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長(zhǎng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

 

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

50次 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 Double-Stain Apoptosis Detection Kit 4℃避光保存

250mL IEF Cathode Buffer,10X IEF Cathode Buffer,10X 常溫保存

100次 即用型熒光定量PCR試劑盒 Instant Fluorescent qPCR Kit -20℃保存

2 ug pLV-cGFPII pLV-cGFPII 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

脆弱擬桿菌活化培養(yǎng)基肉湯 Bacteroides Phage Recovery Medium Broth 250g

1瓶 NCI-H295R細(xì)胞株 NCI-H295R 低溫運(yùn)輸和保存

m-遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基 M-Endo Medium 250g

1mg 親和素 Avidin, Chicken Egg White -20℃保存

500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.8   Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.8   常溫保存

1mg 重組蛋白G Recombinant Protein G -20℃保存

2 ug pBAD/gIII C pBAD/gIII C 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

超氧陰離子測(cè)試盒微量法GLO1  乙二醛1抗體 規(guī)格: 0.1mlTIMP-1(CT)  金屬蛋白組織抑制因子-1抗體(C端) 0.1ml

ChRM3/Acetylcholine receptor(M3)  毒蕈堿型乙酰受體M3抗體 規(guī)格: 0.1mlCCL15/MIP5  巨噬細(xì)胞性蛋白15 規(guī)格: 0.1ml

PNAT/NAT2  N-乙?;D(zhuǎn)移2抗體 規(guī)格: 0.1mlDHRSX  短鏈脫/還原家族X抗體 規(guī)格: 0.2ml

HMGA1/HMG-I/HMG-Y  高遷移率族蛋白A1抗體 規(guī)格: 0.2mlKLLN   Killin-p53調(diào)節(jié)復(fù)制抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

PTGER1  前列素EP1受體抗體 規(guī)格: 0.1mlNoggin  指(趾)關(guān)節(jié)粘連NOG蛋白抗體 0.2ml

phospho-PI3K p85/PIK3R1(Tyr368)  磷酸化磷脂酰肌醇激抗體 規(guī)格: 0.1mlIGSF16/CD300C  免疫球蛋白超家族成員16抗體 規(guī)格: 0.2ml

PRKD1/PKC mu  蛋白激C mu型抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141)  磷酸化p21激活激1/2/3抗體 規(guī)格: 0.1ml

NS5ATP9/KIAA0101  丙型毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2mlIFNAR2/IFNABR  干擾素α受體2抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD4  CD4抗體 0.1mlFOXO1  叉蛋白O1抗體 規(guī)格: 0.1ml

CLEC2D/OCIL  CLEC2D蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

HSPB7/cvHSP  熱休克蛋白β7抗體 規(guī)格: 0.2ml

SLC16A7/MCT2  單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

 


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